凭什么标准来判断精子活力程度呢?
(1)精子悬浮液:取正常新鲜精液,置室温液化20min,加入3~4倍量10%灭活兔血清生理盐水,充分混合后以1000r/min,5min离心,去上清,沉渣以10%兔血清生理盐水溶液10mL造成混悬液,如此洗涤2次,尽量除去精浆,第2次洗涤后的精子沉淀,用10%兔血清生理盐水溶液调整精子浓度为40106/mL,或者就在沉渣上面轻轻加入适量的10%兔血清生理盐水,静置室温,让活动精子上游,收集上层精子,调整浓度为40106/mL备用。
(2)阴性对照血清:取未婚妇女血清,经56℃30min灭活处理后,预作精子制动化检测,证明无精子制动作用,以0.5mL量分装于小试管内,置-20℃中冻结保存,临用前取出一支溶解备用。
(3)补体血清:采用市售或自己制备的豚鼠血清。
(1)A小试管(试验管):加入灭活待检血清0.25mL,精子悬浮液0.025mL,补体0.05mL,充分混合后,置32℃孵育60min。
(2)B小试管(对照管):加入对照血清0.25mL,精子悬浮液0.025mL,补体0.05mL,
混合后作同上处理。
(3)C小管(患者血清对照管):目的是观察患者血清有无使精子出现非特异性制动作用。因此在C管中加入患者血清0.25mL,精子悬浮液0.025mL,但不加补体,混合后作同上处理。
(4)精子不动化值计算:孵育之后,分别从A、B、C管各取1滴混悬液放在载玻片上,用显微镜(200~400)观察活动精子数,具体可观察4个视野,每个视野数50个精子,总数中求出运动精子的百分率,即精子的运动率(%)。
A管的精子运动率为T%;B管的精子运动率为C%;精子不动化值(spermimmobiliza-tionvalue,SIV)为SIV=B管C%/A管T%=C/T2为阳性。
C管只作为试验是否成立的判断,若C管出现制动作用,说明检体血清有非特异性制动作用,故试验不成立。
编辑:陈兰兰
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